核酸提取常见问题

Q1:我想要的试剂盒在产品列表中没找到怎么办?

A: 为了高效的沟通与联系,您可以拨打安序源的订购热线: 0755-86715032

或发送邮件至邮箱: info@axbio.cn

Q2: DNA提取量少的原因?

A:DNA提取量少的原因很多,归结主要有如下几个方面:

实验材料不佳或量少、破壁或裂解不充分、沉淀不完全或洗涤时DNA丢失

a.尽量选用新鲜的材料;b.研磨充分,不能即时处理的样品应立即放入液氮或-70℃低温保存,以免DNA降解。c.低温沉淀,延长沉淀时间;d.加辅助物,促进沉淀;e.洗涤时,最好用枪头将洗涤液吸出,勿倾倒。

● 样品破壁或裂解不完全,DNA未充分释放

材料应在液氮中充分研磨匀浆。

● 样品量过多导致细胞裂解不充分:

加样量过多使裂解液和样品混合不均匀,细胞裂解不充分。不同来源样品的加样量请参见所使用试剂盒的要求标准。

● DNA吸附不充分

如在上吸附柱前未加无水乙醇,或用低浓度乙醇代替无水乙醇,则导致DNA不能充分沉淀,与硅胶膜吸附不彻底,因此应在样品裂解后加适量无水乙醇,再上吸附柱使DNA与硅胶膜充分吸附。

● DNA洗脱不适当

洗脱缓冲液pH值过低会阻碍DNA从硅胶膜上洗脱下来,应确保洗脱液pH值在7.0~8.5之间。洗脱体积过少,若小于30µl,不易完全浸透硅胶膜,使DNA不能全部洗脱下来,因此洗脱缓冲液应大于30µl。同时如洗脱体积过大,超过200µl,则所得的DNA浓度会降低,但DNA总量不会减少。洗脱时可将洗脱缓冲液在65~70℃水浴预热,加入洗脱液后在室温静置2~5分钟,可提高洗脱效率,加大DNA产量。

● 提取的基因组DNA有降解

a.选取的材料不新鲜或反复冻融,采集材料后未及时处理或未低温保存:

b.未能有效抑制内源核酸酶作用:

某些DNase含量较丰富的组织样品应在液氮中研磨或匀浆,研磨过程中应随时补充液氮,并在样品未完全解冻前即加入含有抑制核酸酶作用的鳌合剂的裂解液。

c.操作过于剧烈导致DNA被机械打断:

预处理的样品加入细胞裂解液后,所有操作应尽量柔和,避免振荡、搅拌等剧烈机械力对DNA片段的损伤。

● DNA样品不纯,抑制后续酶解和PCR反应

可能原因: a.DNA中含有蛋白、多糖、多酚类杂质;b.DNA在溶解前,有酒精残留,酒精抑制后续酶解反应;c.DNA中残留有金属离子。

处理办法:a.重新纯化DNA,去除蛋白、多糖、多酚等杂质;b.重新沉淀DNA,让酒精充分挥发;c.增加70%乙醇洗涤的次数(2~3次)。

Q: 洗涤后硅胶膜上仍有杂质残留的原因?

A: 细胞裂解不充分, 裂解液和样品要快速充分混匀。

Q: 使用中出现柱子堵塞的原因?

A:

1.裂解或匀浆处理不彻底。减少样品使用量,增加裂解液用量,增加匀浆和裂解时间。

2.处理样品太多。

Q: A260/A280 比值较低的原因?

A:用水作为洗脱液时,比值偏低。

Q: A260/A280 比值较高的原因

A:大量RNA残留,没有使用RNase A,或RNase A活性下降。

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